spectra were shown to become very different when the metal ions(Al3+, Cr3+, Fe3+) were mixed to the ligand solution (solvent), ethanol: H2O= 4:1).
Purpose
Investigation of the Solvent Effect and pH Effect on
the Absorption, Emission and Excitation Spectra of 6-
[(2,3-Dihydroxy-benzylidene)-amino]-naphthalene-
2-sulfonic acid
r.t
*
UV Spectra Change of DMSO-EtOH
( Ligand concentration - 1E-4)
Objective
We synthesize ethyl acetate from acetic acid and ethanol by esterification using sulfuric acid as a catalyst
Acetic Acid+Ethanol Sulfuric Acid ->Ethyl Acetate
Theory
1. Esterification
2. Reaction path of the Synthesis of
an Ethyl acetate
30번 반복하면 끝난다.
PCR Product Purification
PCR Purification의 목적 : 순수한 DNA를 검출하기 위해
PCR Purification의 과정 및 재료
PCR product Checking (PCR에서 DNA가 증폭됬는지 확인하기 위해)
Ethanol Down
step1)
재료
필요한 양
6X Orange G
1λ
PCR product
5λ
재료
필요한 양
3rd DW
155λ
Chloroform(단백질 녹임)
200λ
PCR product
45λ
때와 같은 방법이 사용된다.
3.1 Total cell DNA의 분리
세균 세포의 배양물로부터 total DNA를 준비하는 방법은 4 단계로 나눌 수 있다.
①세포배양액 - 증식, 수확(원심분리 이용)
②세포파괴 - 내용물 방출
③DNA만 분리 - 단백질 제거(페놀 처리), RNA제거(Rnase 처리)
④DNA 농축 - 2 vol.의 에탄올(EtOH) 처리
ethanol washing 한다.
gel electrophoresis를 통해 RNA가 제대로 추출되었는가의 여부를 확인할 수 있다.
3. Data & Result
rRNA는 무게에 따라 18s, 28s, 5s의 세 부분으로 나눠지는데, electrophoresis 때 나타나는 하얀색 띠 중 맨 위가 28s, 중간이 18s, 맨 아래가 5s이다. 이 세 부분 사이사이에 나타나는 약한 하얀색 띠
ethanol, Bromophenol blue이 들어있다. 그 후 Protein boiling을95℃에서 5분간 시행한다.
▶ Results
▶ Date 2011. 5. 26
▶ Purpose : Western blotting
Gel electrophoresis를 통해 원하는 단백질을 분리한다. 분리한 단백질을 Nitrocellulose membrane에 transfer 시켜 1차 항체를 처리함으로써 immunoblotting을 준비한다.
▶ Prin
EtOH를 넣어 윗부분을 평평하게 만들어 준 후에 굳을 때까지 20분 정도 기다린다.
Separating gel이 굳으면 EtOH를 버리고 Stacking gel을 천천히 넣고 윗부분에 구멍을 내기 위해 comb을 끼우고 굳을 때까지 20분 정도 기다린다.
Stacking gel이 다 굳으면 comb을 빼고 유리 채 랩에 싸서 보관한다.
Prot
1차 염색시약 : Crystal violet, 보라색으로 염색
매염제 : Iodine, Crystal violet 시약을 세포에 더 강하게 고정
탈색제 : 95%, 100% EtOH, 지방용해와 단백질 탈수 작용
2차 염색시약(대응염색제) : Safranin, 이미 탈색된 세포에 대하여 분홍색으로 염색
cold PBS로 2번정도 washing 한다. (1000g->2min centrifuge)25% ethanol 50㎕fh 2min dehydration한 후 60%, 70% ethanol로도 동일하게 수행한다.(PBS는 체액농도와 같기에 다르면 변형되므로 안정하기위해 이것을 사용한다.)/(탈수는 점점늘려야 효과적이다.)
ethanol을 제거하고 50㎕의 Sudan Black B Solution을 넣는다.
실험 방법 : 모든 시약들의 질량은 저울을 사용하여 측정
[1] 잘 건조된 플라스크를 준비한다.
[2] 4-Chlorobenzaldehyde 와 EtOH(solvent), NaBH4 의 양을
계산한 후 저울을 이용하여 무게를 측정하고 순서대로 넣는
다.
[3] Magnetic bar를 넣고 15분 교반후 물(solvent 1/3당량)
을 넣고 15분 더 반응한다.
[4]